干細(xì)胞是一類具有無(wú)限的或者永生的自我更新能力的細(xì)胞、能夠產(chǎn)生至少一種類型的、高度分化的子代細(xì)胞 [1]。干細(xì)胞被認(rèn)為可以提供一種理想的生物學(xué)平臺(tái), 用于多方面的科學(xué)研究與臨床應(yīng)用, 如藥物篩選平臺(tái)的建立、細(xì)胞發(fā)育與分化的分子調(diào)節(jié)機(jī)制研究、基因靶向敲除動(dòng)物模型的構(gòu)建、組織工程種子細(xì)胞及基因治療載體的建立、細(xì)胞治療及再生醫(yī)學(xué)等 [2]。

干細(xì)胞研究離不開(kāi)干細(xì)胞的培養(yǎng)。合格的干細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程，包括促進(jìn)其分裂增殖和維持其未分化狀態(tài)。基于以上兩點(diǎn)要求，目前主流的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)方法為飼養(yǎng)層培養(yǎng)法：即在有絲分裂失活的飼養(yǎng)層細(xì)胞 (FEEDER) 上培養(yǎng)干細(xì)胞。培養(yǎng)體系一般為高糖 DMEM，添加適量的胎牛血清 (FBS) 及白血病抑制因子 (LIF)、L-谷氨酰胺等添加劑。另外，為了避免外源性物質(zhì)的干擾（如血清、病原等成分）[3]，又嘗試及建立了其他培養(yǎng)基, 包括條件培養(yǎng)基 (CM) 、無(wú)飼養(yǎng)層、無(wú)血清、血清替代物 (SR) 非條件培養(yǎng)基等。其中無(wú)血清培養(yǎng)基中添加了更多珍貴的細(xì)胞因子，而血清替代物培養(yǎng)基則采用人工/半人工合成分子替代物的形式，來(lái)替代血清，成本相較于普通胎牛血清*培養(yǎng)基而言，高出不少。

一、飼養(yǎng)層培養(yǎng)法

目前認(rèn)為，飼養(yǎng)層能夠提供的干細(xì)胞接觸所必須的復(fù)雜蛋白分子。自 1981 年 EVANS 等人 [4] 用飼養(yǎng)層成功培養(yǎng)了 mESC 起，飼養(yǎng)層培養(yǎng)法便開(kāi)始不斷發(fā)展。實(shí)驗(yàn)過(guò)程，主要分為以下三步：準(zhǔn)備飼養(yǎng)層細(xì)胞、飼養(yǎng)單層制備、接種干細(xì)胞培養(yǎng)。

飼養(yǎng)層培養(yǎng)法卻存在著不可避免的缺點(diǎn)：

• 1、飼養(yǎng)層細(xì)胞生命期有限，不能在體外長(zhǎng)期傳代。在體外傳代時(shí)間太長(zhǎng)，其產(chǎn)生促增殖因子和抑制分化因子的能力會(huì)減弱甚至喪失。

• 2、MEF 細(xì)胞的染色體干擾：飼養(yǎng)層細(xì)胞會(huì)影響干細(xì)胞遺傳物質(zhì)。 /3、絲裂mei素-C 的影響：飼養(yǎng)層細(xì)胞需要用到絲裂mei素-C，該物質(zhì)可能會(huì)影響干細(xì)胞的增殖。

• 3、異種抗原及污染的影響：飼養(yǎng)層細(xì)胞作為異種抗原也會(huì)影響干細(xì)胞的健康，還有發(fā)生細(xì)胞間融、引入其他動(dòng)物源性病原體，給臨床移植治療帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)。

• 4、所用試劑復(fù)雜，批次不可控：所用材料的批次之間的波動(dòng)，限制了培養(yǎng)物之間的可重復(fù)性。

• 5、實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，培養(yǎng)基配制復(fù)雜：現(xiàn)在市場(chǎng)上有多種多樣的干細(xì)胞培養(yǎng)基可供選擇，大多數(shù)都是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加例如白血病抑制因子（LIF）[6] 這樣的多功能細(xì)胞因子，但無(wú)論進(jìn)口還是國(guó)產(chǎn)的產(chǎn)品，都不免有價(jià)格高昂的缺點(diǎn)。而自己配制，又會(huì)面臨操作繁瑣、易污染等問(wèn)題。而且飼養(yǎng)層培養(yǎng)發(fā)從培養(yǎng)飼養(yǎng)細(xì)胞開(kāi)始，至少需要一周時(shí)間才能得到所需的干細(xì)胞，周期過(guò)長(zhǎng)。

二、無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)

無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)類似普通細(xì)胞培養(yǎng)，主要分為以下幾個(gè)步驟：培養(yǎng)瓶預(yù)處理、配制培養(yǎng)基、消化干細(xì)胞、接種、培養(yǎng)。

相較于飼養(yǎng)層培養(yǎng)法，無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)顯而易見(jiàn)：更加簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間；但缺點(diǎn)也十分明顯：

• 1、培養(yǎng)的細(xì)胞質(zhì)量不穩(wěn)定：由于自行配制的培養(yǎng)基，不可控因素較多，缺少營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞對(duì)的存在，干細(xì)胞生長(zhǎng)狀況也不穩(wěn)定，直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

• 2、成本高昂：商品化的培養(yǎng)基，根據(jù)品質(zhì)不同，價(jià)格也是從幾百元到幾千元不等，直接增加了干細(xì)胞的培養(yǎng)成本。

• 3、需要不斷對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行調(diào)整，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員有很高的要求：無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)法需要人為添加各種各樣的細(xì)胞因子，不同的干細(xì)胞還需要進(jìn)行細(xì)微的調(diào)整以適應(yīng)不同的生長(zhǎng)需求，因此培養(yǎng)難度更高，對(duì)技術(shù)人員的操作水平及經(jīng)驗(yàn)有很高的要求

三、干細(xì)胞*培養(yǎng)基培養(yǎng)法

我們都知道，一直以來(lái)，干細(xì)胞的培養(yǎng)方法被飼養(yǎng)層培養(yǎng)法和無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)法所「統(tǒng)治「，近日，一項(xiàng)新技術(shù)——干細(xì)胞*培養(yǎng)基培養(yǎng)法問(wèn)世！這項(xiàng)重大突破，兼顧了上述兩種培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)又巧妙規(guī)避了它們的致命缺點(diǎn)，大大降低了干細(xì)胞培養(yǎng)的技術(shù)門檻！

干細(xì)胞*培養(yǎng)基是一種真正意義上的全新干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)！在含微量胎牛血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，通過(guò)添加一種人永生化干細(xì)胞系的條件培養(yǎng)基混合組成。干細(xì)胞*培養(yǎng)基含有多種促進(jìn)細(xì)胞增殖的生長(zhǎng)因子，如表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）、神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子（NGF）、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）、血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）及干細(xì)胞分化抑制因子等。因此，干細(xì)胞*培養(yǎng)基具有促進(jìn)干細(xì)胞增殖、抑制干細(xì)胞分化及維持干細(xì)胞表型，增加干細(xì)胞的傳代次數(shù)的作用，可廣泛應(yīng)用于人及動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞及各種組織來(lái)源的成體干細(xì)胞的培養(yǎng)。

由于人永生化干細(xì)胞系的使用，使得干細(xì)胞*培養(yǎng)基無(wú)需額外添加細(xì)胞因子或其他人工合成促生長(zhǎng)成分，因此，相較于其他商品化的干細(xì)胞培養(yǎng)基、干細(xì)胞培養(yǎng) Kit、無(wú)血清培養(yǎng)基、血清替代物 (SR) 非條件培養(yǎng)基等產(chǎn)品，用干細(xì)胞*培養(yǎng)基進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，成本相對(duì)更低，但效果卻是更上一層樓。

縱觀整個(gè)干細(xì)胞培養(yǎng)基市場(chǎng)，能同時(shí)滿足以上幾個(gè)條件的產(chǎn)品可以說(shuō)是鳳毛麟角。而 Ausbian 干細(xì)胞*培養(yǎng)基則是其中的優(yōu)秀代表，讓實(shí)驗(yàn)者可以輕松上手，各種干細(xì)胞培養(yǎng)都變得小菜一碟！

首先，Ausbian 干細(xì)胞*培養(yǎng)基擁有與眾不同的技術(shù)，使得培養(yǎng)基本身就含有豐富的細(xì)胞因子，其中包含了所有含有促進(jìn)干細(xì)胞生長(zhǎng)和抑制干細(xì)胞分化的各種因子，因此能夠有效維持干細(xì)胞的干性，抑制干細(xì)胞的分化。

其次，無(wú)需額外添加和二次配制，更省去了體現(xiàn)制備飼養(yǎng)層的復(fù)雜操作，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況每 2-3 天更換一次培養(yǎng)基。這在無(wú)形之中減少了細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)步驟，熟悉細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的小伙伴應(yīng)該都知道，實(shí)驗(yàn)步驟越簡(jiǎn)潔，不可控因素也就越少，實(shí)驗(yàn)出錯(cuò)的概率也會(huì)更低，因此，使用干細(xì)胞*培養(yǎng)，使實(shí)驗(yàn)更簡(jiǎn)單，可以大大縮短時(shí)間成本；培養(yǎng)的干細(xì)胞品質(zhì)更穩(wěn)定，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)要求也更低，節(jié)省人力成本，輕輕松松讓干細(xì)胞茁壯成長(zhǎng)。

不僅如此，因?yàn)樯倭孙曫B(yǎng)細(xì)胞的干擾，也沒(méi)有絲裂mei素-C 等物質(zhì)的添加，所以用 Ausbian 干細(xì)胞*培養(yǎng)基能夠收獲純度更高、遺傳物質(zhì)更穩(wěn)定的干細(xì)胞。

在培養(yǎng)細(xì)胞有效性方面，許多科研人員對(duì)其進(jìn)行了評(píng)估：培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞可以細(xì)胞傳代次數(shù) 8-10 次、培養(yǎng)成體干細(xì)胞可以使細(xì)胞的增殖速率增加 300%，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。

1. 人成體干細(xì)胞（3 代）增殖實(shí)驗(yàn)：CCK8 分析

2. 人間充質(zhì)干細(xì)胞（3 代）增殖實(shí)驗(yàn)：CCK8 分析

3. 細(xì)胞傳代次數(shù)：

Ausbian 干細(xì)胞*培養(yǎng)基另外一項(xiàng)革命性的突破在于，可廣泛應(yīng)用于人及動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞及各種組織來(lái)源的成體干細(xì)胞的培養(yǎng)，省去了更換細(xì)胞時(shí)反復(fù)調(diào)試培養(yǎng)基的繁瑣步驟，很高的普適性進(jìn)一步降低了人力、物力以及時(shí)間成本。

說(shuō)完有效性再來(lái)看看安全性。Ausbian 干細(xì)胞*培養(yǎng)基均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量檢驗(yàn)，無(wú)論是支原體還是衣原體檢測(cè)均為陰性，無(wú)農(nóng)藥污染及重金屬超標(biāo)，同時(shí)還進(jìn)行了放射性照射，確保培養(yǎng)基無(wú)任何病原體及病毒污染，確保內(nèi)毒素極低，為干細(xì)胞提供一個(gè)安全健康的生長(zhǎng)環(huán)境。

最后要說(shuō)明的是，Ausbian 干細(xì)胞*培養(yǎng)基是我國(guó)的科學(xué)家自主研發(fā)的，其中制備的永生化人干細(xì)胞系為具有獨(dú)te性，制備產(chǎn)品所使用的永生化人干細(xì)胞系國(guó)內(nèi)同類產(chǎn)品，貨源充足，供貨穩(wěn)定，供貨周期短，保證干細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)「斷糧」的情況，讓實(shí)驗(yàn)者更安心！

參考文獻(xiàn)：

1. 裴雪濤．干細(xì)胞生物學(xué)：科學(xué)出版社，2003：4-15

2. 吳靜,胡東,張榮波.胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)方法研究進(jìn)展[J].廣東醫(yī)學(xué),2010,31(01):116-118.

3. J.A. Burdick, G. Vunjak-Novakovic Engineered microenvironments for controlled stem cell differentiation Tissue Eng. Part A, 15 (2009), pp. 205-219

4. Evans MJ, Kaufman MH. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos. Nature. 1981 Jul 9;292(5819):154-6. doi: 10.1038/292154a0. PMID: 7242681.

5. 田小利，陳蘭英，扈萊良. 1994.　轉(zhuǎn)基因方法Ⅱ：胚胎干細(xì)胞法. 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物原理、技術(shù)與應(yīng)用. 吉林科技出版社， 26～32

Williams RL, Hilton DJ, Pease S. 1988. Myeloid leukaemia inhibitory factor maintains the developmental potential of embryonic stem cells. Nature, 336: 684～687